撸啊撸av-国产精品人成在线观看-黄色一级免费大片-国产suv精品一区二区四-欧美性视频在线-亚洲永久精品ww47-丝袜+亚洲+另类+欧美+变态-99色精品-国产区高清-精品一区在线视频-91在线无精精品一区二区-亚洲一区国产精品-国产成人精品免费视频大全最热-女女女女bbbb日韩毛片-久日精品-国产一级在线播放-亚洲狼人av-国产成人精品热玖玖玖-台湾无码一区二区-人妻熟妇女的欲乱系列

細(xì)胞培養(yǎng)需要提供合適的溫度和氣體環(huán)境，因此一般采用培養(yǎng)箱的形式來滿足細(xì)胞培養(yǎng)的要求。

 

細(xì)胞培養(yǎng)的具體步驟：

 

1、細(xì)胞復(fù)蘇

 

將凍存細(xì)胞從液氮中取出后，在37℃水浴鍋內(nèi)不斷搖動(dòng)促進(jìn)其融化。移人15ml離心管中，加入10ml預(yù)熱的DMEM*培養(yǎng)基，輕輕吹勻，離心，2000rpmX2min，棄上清液。

 

加入10ml DMEM培養(yǎng)基清洗，棄上清液。加入10ml DMEM*培養(yǎng)基，輕輕吹打，接種于10cm盤中，在含5%CO2的細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

 

2、細(xì)胞傳代

 

細(xì)胞密度達(dá)到80%~90%時(shí)．去培養(yǎng)基，10ml PBS清洗2次。加入3ml含0．25%EDTA的胰蛋白酶，放人細(xì)胞培養(yǎng)箱3min。加人1ml DMEM*培養(yǎng)基終止胰酶消化，轉(zhuǎn)移至15ml離心管。

 

加入10ml PBS清洗細(xì)胞培養(yǎng)盤，轉(zhuǎn)移至15ml離心管，2000rpmX2min，棄上清液。再加入10ml PBS（經(jīng)高壓滅菌，保存于40C），吹勻，吸取10微升進(jìn)行計(jì)數(shù)，按照1×106/盤接種，在含5%CO2的細(xì)胞培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)。

 

3、細(xì)胞凍存

 

細(xì)胞密度達(dá)到80%～90%時(shí)，去培養(yǎng)基，10ml PBS清洗2次。加入3ml含0.25%EDTA的胰蛋白酶，放人細(xì)胞培養(yǎng)箱3min。加入lmlDMEM*培養(yǎng)基終止胰酶消化，轉(zhuǎn)移至15ml離心管。加入10ml PBS清洗細(xì)胞培養(yǎng)盤，轉(zhuǎn)移至15ml離心管，2000rpmX2min，棄上清液。

 

加入lml凍存液（90%血清，10%DMSO），放入凍存盒內(nèi)（盒內(nèi)有異丙醇，以保證溫度降低的速度），立即放入一80℃冰箱內(nèi)，過夜，第二天放入液氮中，可以保存至少兩年，如不放人液氮，可以保存三個(gè)月。